全身性敲除
基因敲除是研究基因功能的重要方法。全身性基因敲除或完全基因敲除，即KO（Knockout），是指在大鼠或小鼠所有组织细胞中，将目的基因的某些指定外显子或功能结构域、甚至该基因所有外显子敲除掉，导致目的基因缺失。
传统ES打靶敲除方法，周期长，费用高。CRISPR/Cas9在基因敲除方面的优势：效率高，时间短，24天直接获得基因敲除小鼠。
1. 技术流程：
设计合成gRNA→ 显微注射→ 小鼠出生检测
2. 技术优势
-效率高，可达90%的敲除效率，并且有一定纯合敲除比例。
-方便检测，从PCR条带的大小，容易区分是否发生敲除。
-时间短，24天获得基因敲除小鼠。
-不受敲除片段大小限制，从几十bp到Mb长度的DNA均能有效敲除。
3. 成功案例：
利用CRISPR/Cas9技术，设计两个sgRNA敲除与异常肺静脉回流 (APVR) 相关的Plxnd1基因，制作该基因的全身性敲除小鼠 (Zhou WZ, et al. 2022)。
图1. Plxnd1−/− 小鼠表现严重皮下出血和身材矮小等症状（n=27）
图2. Plxnd1−/− 小鼠和野生型小鼠的肺组织形态观察
参考文献：
1. Zhou WZ, Zeng Z, Shen H, et al. Association of PLXND1 with a novel subtype of anomalous pulmonary venous return. Hum Mol Genet. 2022, 31(9):1443-1452.
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